【摘要】 目的 研究IGF-1R、EGFR蛋白在食管鳞癌患者中的表达情况及其临床意义。方法 应用免疫组织化学SP法检测50例食管鳞癌患者IGF-1R、EGFR蛋白的表达情况， 取20例手术标本正常组织作为对照组。结果 食管鳞癌中IGF-1R蛋白阳性表达率明显升高（χ2=28.29， P<0.05）， EGFR蛋白阳性表达率明显升高（χ2=4.56， P<0.05）。IGF-1R的阳性表达与食管癌的病理分级有关， 分级越高阳性率越高， 与浸润深度有关， 侵及深肌层及外膜IGF-1R的表达明显高于侵及浅肌层及黏膜的表达， 与TNM分期有关， 分期越晚阳性率越高， 差异均有统计学意义。淋巴结转移组IGF-1R或EGFR的表达明显高于非转移组。结论 初步结果分析显示IGF-1R可能与食管鳞癌的病理分级及侵袭、转移有关， EGFR可能与食管鳞癌的转移有关。
【关键词】 食管癌；IGF-1R蛋白；EGFR蛋白；免疫组织化学
Expression and significance of IGF-1R and EGFR protein in esophageal squamous carcinoma ZHANG Jun-kai， PAN Pei-ling， WU Ying-meng. Department of Oncology， People"s Hospital of Zhongshan， Zhongshan 528403，China
【Abstract】 Objective To investigate the expression of IGF Type 1 Receptor protein and EGFR protein in esophageal squamous carcinoma patients and its clinical significance. Methods The expressions of IGF-1R and EGFR protein were detected in 50 patients with esophageal squamous carcinoma， 20 cases of normal esophageal tissue by SP immunohistochemistry method. Results The positive rate of IGF-1R protein was markedly higher in esophageal squamous carcinoma than in normal esophageal tissue. （χ2=28.29， P=0.032）. The positive rate of EGFR protein was also higher. （χ2=4.56， P<0.05）. Close correlation was found on the expression of IGF-1R between pathological grade of esophageal squamous carcinoma，the invasion of tumor and TNM stages. Difference was statistically significant. The expression of IGF-1R or EGFR was higher in lymph node metastasis positive patients than that in negative patients. Conclusion The expression of IGF-1R protein has some relationship with the pathological grade， invasion， metastasis and esophageal squamous carcinoma. The expression of IGF-1R protein has some relevance with the metastasis of esophageal squamous carcinoma.
【Key words】 Esophageal carcinoma； IGF Type 1 Receptor protein； EGFR protein； Immunohistochemistry
本文应用免疫组化的方法研究IGF-1R和EGFR在食管鳞癌中的异常表达，对食管鳞癌中使用靶向治疗具有积极意义。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 入选50病例本院2009年8月～2011年12月经手术切除食管癌标本， 且经病理证实均为食管鳞状细胞癌， 所有病例术前均无其他恶性肿瘤或严重内科疾病， 术前均未接受化疗、放疗及免疫治疗。其中男性47例， 女性3例， 年龄32～74岁， 平均52.5岁。取20例手术标本正常组织作为对照组， 正常组织取自手术残端， 距癌组织3 cm以上。
1. 2 试剂及方法 采用免疫组化检测50例患者及20例正常组织中IGF-1R、EGFR蛋白的表达情况。标本经40 g/L甲醛固定， 石蜡包埋， 每块连续切取3张4 μm厚的切片，贴附于用生物胶处理的载玻片上， 60℃烤60 min。切片脱蜡至水， 清洗3次。体积分数0.03的H2O2封闭内源性过氧化物酶20 min， 清洗3次。切片微波抗原修复、冷却、清洗。按说明书滴加抗体， 湿盒4℃过夜。清洗后， 滴加二抗， 37℃30 min。清洗3次。DAB显色， 苏木精衬染， 脱水， 封片， 光学显微镜下观察。
1. 3 结果判断 以PBS代替一抗作为阴性对照。IGF-1R蛋白表达阳性为胞膜上出现棕黄色细颗粒。综合染色强度及分布范围进行半定量分析：染色强度阴性为0分， 染色弱但强于阴性对照为1分， 染色清晰为2分， 染色强为3分， 分布范围评分标准：阳性细胞数<10%为0分， 10%～30%为1分， 31%～60%为2分， >60%为3分。上述两种评分相加0～1分为（-）， 2分为（+）， 3～4分为（++）， 5～6分为（+++）。+为阳性表达， ++、+++为过度表达。操作EGFR蛋白以细胞膜和细胞浆染成棕黄色为阳性染色， 细胞膜或细胞浆里淡黄（染色弱）、棕黄（中等强度染色）和棕褐色（强阳性）。每张切片随机观察10个高倍视野， 按染色强度及阳性细胞数分为3级：阴性（-） ，无阳性细胞；弱阳性（±） ，< 50%细胞呈弱、中等强度染色， 强阳性细胞数<30%；阳性（+），≥50 %细胞呈弱、中等强度阳性细胞， 强阳性细胞数≥30%。其中IGF-1R抗体购自福建迈新公司。EGFR抗体购自北京金菩嘉公司。
1. 4 统计学方法 所有统计处理均用SPSS 13.0统计软件进行。计数资料频率比较及相关性分析采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
3 结论
胰岛素样生长因子（IGF）包括IGF-1和IGF-1R， 属于多肽类家族的成员， 与胰岛素约有50%的同源性[1]。IGF-1R主要分布在细胞膜上， 能促进体外培养细胞的有丝分裂[2]。细胞的增生与细胞膜上IGF-1R的数目成正比，当IGF-1R表达水平下降或IGF-1R丢失会导致肿瘤细胞大量凋亡；相反， IGF-1R表达水平升高则会抑制细胞凋亡[3]。Chen [4]研究发现IGF-1R和EGFR在食管癌细胞系CE48T/VGH中过度表达。表皮生长因子受体（ EGFR）与其配体EGF或TGF-α结合可激活受体本身的酪氨酸蛋白激酶活性， 进一步激活信号传导系统， 刺激细胞生长增殖。日本、美国和法国的研究资料表明，食管鳞癌细胞系EGFR 基因扩增率为8%～30%[5]。
国内吴慧等研究结果示， 食管鳞癌组织中IGF-1R的阳性表达率明显高于正常组织， 并且在浸润深层的癌组织中阳性表达率明显高于浅层组， 淋巴结转移组的表达率明显高于非转移组， 两者相比差异有统计学意义[6]。Imsumran [7]研究100例外科手术切除的食管鳞癌患者， 使用免疫组化的方法检测IGF-IR和IGF-II配体的表达和预后的关系。结果提示IGF-IR和IGF-II蛋白分别在60%和50%的食管鳞癌标本中有表达阳性， 而且和肿瘤的浸润深度、转移、分期较晚、复发等有关联 [7]。Carneiro 等 [8]报道30例食管鳞癌患者中19例显示EGFR强阳性表达（ 免疫染色为3+）， 其中12例有基因扩增的现象， 另外11例患者中， 仅2例基因扩增， EGFR过表达与基因扩增发生一致。
本研究结果中， IGF-1R和EGFR在食管鳞癌组织中的表达高于在正常食管黏膜上皮中的表达， 差异有统计学意义。本研究还发现， IGF-1的阳性表达与食管癌的病理分级有关， 分级越高阳性率越高， 与浸润深度有关， 侵及深肌层及外膜IGF-1的表达明显高于侵及浅肌层及黏膜的表达， 与TNM分期有关， I期、Ⅱ期、IIIA和B期， 分期越晚阳性率越高， 差异均有统计学意义。说明IGF-1可能参与了食管癌的病理分化及侵袭、进展。淋巴结转移组IGF-1R或EGFR的表达明显高于非转移组， 提示IGF-1与EGFR可能参与了食管癌的淋巴道转移。
综上所述， 本研究提示IGF-1R和EGFR在食管鳞癌的异常表达可成为食管鳞癌的重要生物学指标， 由于本研究样本例数较少， 关于IGF-1R和EGFR的蛋白表达是否为影响食管鳞癌预后的独立危险因素， 还有待进一步研究。
参考文献
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